عناصر مشابهة
عزل إنزيم برولايديز من السائل الأمنيوتي ودراسة صفاته الحركية وألفته تجاه المركبات الدوائية
| العنوان بلغة أخرى: | Isolation of Prolidase from Amniotic Fluid and Study of its Kinetic and Affinity Properties towards Pharmacological Compounds |
|---|---|
| المصدر: | مجلة التربية والعلم |
| الناشر: |
جامعة الموصل - كلية التربية
|
| المؤلف الرئيسي: | |
| المجلد/العدد: | مج28, ع3 |
| محكمة: | نعم |
| الدولة: | العراق |
| التاريخ الميلادي: | 2019 |
| الصفحات: | 52 - 72 |
| DOI: | 10.33899/edusj.2019.162958 |
| ISSN: | 1812-125X |
| رقم MD: | 1201776 |
| نوع المحتوى: | بحوث ومقالات |
| اللغة: | Arabic |
| قواعد المعلومات: | EduSearch |
| مواضيع: | |
| رابط المحتوى: |
| المستخلص: | تضمن البحث عزل إنزيم برولايديز من سائل الأمنيوني باستعمال التقنيات الحياتية المختلفة، إذ تم عزل قمة بروتينية واحدة بتقنية الترشيح الهلامي نوع سيفادكس 50 G-ونوع سيفادكس 100 G-للراسب البروتيني الناتج من عملية الترسيب بكبريتات الأمونيوم (60%) بعد عملية الفرز الغشائي. وقدر الوزن الجزيئي التقريبي للإنزيم باستعمال تقنية الترشيح الهلامي نوع (100-G) التي كانت بحدود 52269.7 دالتون، وبلغت فعاليته النوعية 13516.6 وحدة إنزيم/ملغم من البروتين ذي عدد مرات تنقية وصلت 75 مرة. أظهرت النتائج أن الظروف المثلى للإنزيم المنقى من سائل الأمنيوني عند استعمال تركيز 50 مايكرو غرام/مل للبروتين كمصدر للإنزيم باستعمال المحلول المنظم ترس-حامض الهيدروكلوريك بتركيز 60 ملي مول/لتر وعند أس هيدروجيني 8.0 وزمن تفاعل 32 دقيقة ودرجة حرارة 39° م. وباستعمال رسم )لاين ويفر– برك( تم إيجاد قيمة السرعة القصوى Vmax)) وثابت ميكيلس (Km) التي كانت مساوية ل 3448.2 وحدة إنزيم/لتر و 10 ملي مول/لتر على التوالي عند استعمال مادة الأساس نوع كلايسين-برولين (Gly-pro). وأخيراً تم دراسة تأثير بعض المركبات الكيميائية الدوائية على فعالية الإنزيم، وبينت النتائج أن المركبات الكيميائية الدوائية من السيراميد وميتوكلوبراميد وبسيدوفيدرين وداي فيهايدرامين-هايدروكلوريد وكلورمفينكول وباراسيتامول وأولوبيرانول أعطوا تثبيطاً من نوع التنافسي، الذين كانت لهم زيادة في قيمة KM وصلت إلى 66.6، 71.42، 52.63، 55.55، 83.33، 90.9، 100.0 ملي مول/لتر على التوالي للمثبطات أعلاه، أما المركبات الدوائية من نوع ثيوفيلين وكافايين وميترونيدازول وكلورفينيرامين ماليت أعطوا تثبيطاً من النوع غير التنافسي، ووصل الانخفاض في قيمة Vmax للمثبطات من هذا النوع إلى 2173.9، 2439.0، 2000.0 و 2325.58 وحدة إنزيم/ لتر على التوالي، ولكن لوحظ أن الدكساثامازون منشط للإنزيم وبمقدار 27.18 وحدة إنزيم / لتر. The research included the isolation of prolidase from human amniotic fluid using different biochemical techniques, One proteinous peak had been isolated by gel filtration using sephadex (G-50) and from sephadex (G-100) that produced by ammonium sulphate precipitation (60%) after dialysis. The approximately molecular weight of the enzyme using gel filtration chromatography (G-100) was (52269.7) Dalton and specific activity of 13516.6 unit/mg protein with 75 fold of purification. The results showed that the optimum conditions of purified enzyme from amniotic fluid were at (50 μg/ml) of protein as a source of the enzyme using (60 mM/L) Tris-HCl buffer solution at pH (8.0) act for (32) minutes at (39ºC). Using Line Weaver-Burk plot, the values of maximum velocity (Vmax) and Michaelis constant (Km) were found to be (3448.2 U/L) and (10 mM/L) respectively using Gly-Pro as a substrate. Finally, also, involved the study of the effect pharmacological chemicals compounds on the enzyme activity, the results showed that the drug chemical compounds for type ceramide, metoclopramide, pseudoephedrine, diphenhydramine-HCl, chloramphnicol, paracetamol and allopurinol give the inhibition type competitive, with increased in Km value to 66.6, 71.42, 52.63, 55.55, 83.33, 90.9 and 100.0 mM/L respectively for inhibitors above, while the others pharmacological compounds for the ophlline anhydrous, caffeine anhydrous, metronidazole and chlorpheniramine maleate, give the inhibition type of non-competitive with decreased in Vmax values to 2173.9, 2439.0, 2000.0 and 2325.58 U/L respectively, but dexathamazone was an activator to the prolidase approximately 27.18 U/L. |
|---|
